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收稿日期：2007-10-25基金项目：深圳市科技和信息局基金资助项目作者简介：王丹（1982-），女，辽宁本溪人，硕士研究生，从事植物生物技术研究。注：雷江丽为通讯作者。大花美人蕉茎尖组织培养技术研究王 丹1,2，雷江丽2，吴燕民3，吕 慧2，郁继华1(1.甘肃农业大学 农学院，甘肃 兰州 730070；2.深圳市园林科学研究所，广东 深圳 518003；3.中国农业科学院 生物技术研究所，北京 100081)摘 要：以大花美人蕉（Canna×generalis）根茎茎尖为外植体进行组织培养技术研究，筛选出芽诱导适宜的培养基为MS + 6-BA （单位下同）+ TDZ ；MS + 6-BA + TDZ + NAA 培养基能较好地诱导分化出丛生芽, 继代增殖培养中与MS + 6-BA + TDZ + NAA 培养基交替使用可减少畸形芽，增殖系数达；适宜的生根培养基为MS + 6-BA + NAA ，生根率达，且植株生长健壮，移栽易成活。关键词：大花美人蕉；茎尖；组织培养中图分类号： 文献标识码：A 文章编号：1009-7791(2008)01-0033-04Research on Shoot-tip Culture of Canna×generalisWANG Dan1,2, LEI Jiang-li2, WU Yan-min3, LÜ Hui2, YU Ji-hua1( of Agronomy, Gansu Agricultural University, Lanzhou 730070, Gansu China; Institute of LandscapeGardening, Shenzhen 518003, Guangdong China; Research Institute, Chinese Academy of AgriculturalSciences, Beijing 100081, China)Abstract: The paper mainly studied on tissue culture of Canna×generalis with the stem tips asexplants. The results showed that the bud inoculation medium was MS + 6-BA ; the best of clump shoot induction and differentiation medium was MS + 6-BA +TDZ + NAA ; using MS + 6-BA + TDZ + NAA asproliferation medium, an optimal proliferation rate was obtained. When the two kinds of mediumused alternatively, the effect was better. The optimum rooting medium was MS + 6-BA +NAA , the rate of rooting could reach , and cultured in this medium, the plant grewwell and easy to words: Canna×generalis; shoot-tip; tissue culture大花美人蕉(Canna×generalis)属美人蕉科(Cannaceae)美人蕉属(Canna)的园艺杂交种[1]，是多年生喜光宿根草本花卉，原产美洲热带和非洲等地。其枝叶茂盛、花朵艳丽、姿态优美、花期长，在深圳地区几乎全年开花，是配置大型花坛的优良品种。大花美人蕉不仅观赏价值高，而且能吸收硫、氯、氟、汞等有害物质，具有净化空气、保护环境的作用，因此，世界许多城市的园林绿化中都广泛应用。美人蕉传统的繁殖方式主要采用分切地下根茎的方法，繁殖速度慢、增殖效率低，而且连续营养繁殖造成病毒积累致使病毒病在各地相当普遍，严重影响其观赏价值。利用茎尖组织培养进行脱毒试管苗快繁，是目前大力繁殖与推广美人蕉的主要手段。关于美人蕉组织培养的研究报道较少[2,3]，本研究探索其组织培养高效的再生体系，以期为品种提纯复壮及遗传转化、性状改良奠定基础。2008,37(1): Plant Science第·34· 37 卷1 材料与方法 材料供试材料为目前城市绿化中普遍应用的大花美人蕉‘President’品种。 外植体选择与处理选择生长健壮、无病虫害的优良母株，挖取带芽胞的根茎，去除表面老皮并用肥皂水清洗。用75%乙醇棉擦拭，然后采用不同的消毒剂及处理时间（升汞10min、2%次氯酸钠10min、2%次氯酸钠20min、2%次氯酸钠 + 升汞5min、2%次氯酸钠 + 升汞10min），封闭式振摇灭菌。无菌水冲洗5 次，置于超净工作台上备用。接种前，剥去外部叶片，露出生长点，立即切取茎尖进行接种。 培养方法及培养条件试验于2006 年10 月在深圳市园林科学研究所组培室进行。诱导、增殖和生根培养基均选用MS为基本培养基，在不同培养阶段附加不同种类、不同浓度配比的植物生长调节剂（表2～表4），蔗糖3%，pH 。培养温度(28±2)℃，光照强度2 500 lx，光照周期为14h/d，相对湿度70%～80%。每处理接种30 瓶。定期观察试管苗生长与分化情况。2 结果与分析 不同消毒处理方式对外植体无菌化的影响因供试外植体取自美人蕉地下根茎，表面污染物较多，不易消毒，且不同植物及外植体的成熟度对消毒剂的反应不同，故本试验选用升汞和次氯酸钠进行灭菌效果比较，以筛选合适的消毒剂及消毒处理时间。由表1 可知，2%次氯酸钠20min 处理的无菌化效果较好，但茎尖褐化较严重，说明灭菌时间过长对去老皮后的幼嫩根茎影响较大。升汞10min 处理与2%次氯酸钠 + 升汞 10min处理，无菌化效果差异不大，但2%次氯酸钠 + 升汞 10min 处理有轻微药害。因此，后续实验选用升汞处理10min 进行外植体消毒。 不同生长调节剂配比对芽诱导的影响以MS 为基本培养基，附加不同浓度6-BA、NAA、2,4-D、KT、TDZ 等（表2），以筛选出较适宜美人蕉茎尖诱导分化的配方。因美人蕉根茎具有休眠特性，芽诱导分化较难。TDZ 具有很强的促进细胞分裂活性，～μmol/L 即可有效促进分化[4]，因此，本实验对TDZ 的诱导效果进行初步探索。试验表明，在不添加任何生长调节剂的MS 基本培养基（1 号）上，茎尖接种10d 后开始生长，叶片展开后，生长停止；15d 后转接到新的MS 培养基上无明显生长，随后叶片逐渐变黄、萎蔫，说明基本培养基中添加生长调节剂是美人蕉离体培养的必要条件。在仅添加6-BA 的2、3、4 号培养基中，高浓度的2 号培养基分化率为，明显好于3、4号培养基，说明美人蕉启动芽诱导分化需要高浓度的细胞分裂素（表2）。11～16 号培养基添加物为不同生长调节剂与TDZ 组合（表2）。仅添加TDZ 的培养基分化率为0，而多种生长调节剂配合使用分化效果更好[5]。其中15 号培养基的侧芽分化率最高，达，且每个茎尖可增殖2～3 个侧芽，但个别茎尖经多次转接后有畸形芽；与2 号培养基相比，分化率明显提高，说明添加低浓度TDZ 可促进芽诱导分化（表2）（图版-a）。5、6、7 号培养基为生根培养基，探讨NAA 对美人蕉茎尖生长和生根的影响。试验结果初步说明美人蕉在6-BA/NAA 小于2/ 时生根率可达50%以上（表2）。8、9、10 号培养基，探讨美人蕉脱分化，诱导愈伤组织，但结果均不理想。因此，建立高效的美表1 不同消毒剂及处理时间对外植体无菌化的影响处 理 接种数污染数污染率(%) 药害情况升汞10min 30 5 基本无药害2%次氯酸钠10min 30 12 无药害2%次氯酸钠20min 30 4 20%有轻微药害2%次氯酸钠+升汞5min 30 10 3%有轻微药害2%次氯酸钠+升汞10min 30 5 7%有药害第1 期 王丹,等：大花美人蕉茎尖组织培养技术研究 ·35·人蕉遗传转化再生体系还需进一步探索愈伤组织诱导途径。 芽继代增殖为了探讨优化的芽继代增殖培养基配方，按表3 设计6-BA、NAA、TDZ 的正交实验，以15 号培养基上分化出的丛生芽为接种材料，进行继代增殖培养（图版-b）。由表3 可见，除17、18 号培养基外，低浓度TDZ（）的分化促进作用较高浓度（）的效果好，说明高活性的TDZ 浓度过高反而抑制分化。当 时, NAA 促分化作用显著优于。在TDZ、NAA 浓度相同的情况下，随着6-BA 浓度的升高，分化率提高。但随着继代次数的增多，含高浓度6-BA的27 号培养基分化率略有下降，甚至有个别畸形芽产生，说明高浓度细胞分裂素对短期的分化有促进作用[9]，但继代数次后，芽已经萌动，自身具有分化能力，需适当降低6-BA 浓度进行壮苗，以避免畸形芽产生。因此，在增殖过程中交替使用分化增殖系数较高的19 号培养基和27 号培养基，既可保证较高的芽分化率，又可使继代苗生长健壮，减少畸形芽。 生根诱导增殖芽3～5cm 长时，转接到生根培养基上培养约10d 后，可见到根生成（图版-c）。接种20d 后统计生根结果（表4）。从表4可见，所用培养基上都有根生成，说明美人蕉生根较容易；结合生根率和生长势，我们认为MS + 6-BA + NAA 培养基较适宜美人蕉生根。表2 不同植物生长调节剂组合的比较植物生长调节剂(mg/L) 编号6-BA NAA 2,4-D KT TDZ分化率(%) 生根率(%) 备注1 0 0 0 0 02 9 0 0 0 0 参考[2]3 5 0 0 0 0 参考[3]4 3 0 0 0 0 2 1 0 0 0 2 0 0 0 2 0 0 0 08 0 0 4 0 09 0 0 2 1 0 参考[6]10 0 0 2 0 参考[7]11 0 0 0 0 012 0 0 0 参考[8]13 0 0 0 0 0 1 0 8 0 0 0 5 0 0 表3 不同生长调节剂配比对芽继代繁殖的影响生长调节剂(mg/L) 编号6-BA NAA TDZ接种数分化率(%)增值系数 生长势17 30 ++18 30 ++19 30 ++20 30 ++21 30 ++22 30 ++23 30 ++24 30 +25 30 ++26 30 +27 30 ++28 30 +注：++ 表示生长势强；+表示生长势弱。同列中不同字母表示差异显著(P＜＝，表4 同。表4 不同的生长调节剂配比对组培苗生根的影响生长调节剂(mg/L) 编号6-BA NAA接种数生根苗数生根率(%)植株生长势29 0 30 19 +30 0 30 21 ++31 30 20 +++32 30 16 ++注：+++ 表示生长势强；++表示生长势中等；+表示生长势弱。第·36· 37 卷3 结 论美人蕉根茎生长在土壤中，无菌化操作较困难。灭菌试验表明，升汞震荡灭菌10min 效果较好，采回的外植体应尽快处理接种，放置时间过长伤口处易染菌，导致接种后褐化较严重。MS + 6-BA + ZDT + NAA 培养基能较好地诱导分化丛生芽，MS + 6-BA + TDZ NAA 为较好的增殖培养基，在增殖培养过程中这两种配方交替使用效果更好；短时间使用高浓度生长调节剂对增殖有促进作用，但长时间使用高浓度生长调节剂会使组培苗质量下降。在试验中还发现，转接次数多的茎尖较转接次数少的分化率大，建议在接种后的10～20d 内及时转接。选用MS + 6-BA + NAA 为生根培养基，生根率较高，根系粗壮、根毛密集，植株生长健壮（图版-d），且移栽成活率较高。参考文献:[1] Segeren W, et al. The genus Canna in Northern South America[J]. Acta Bot Neerl., 1971,20(6): 663-680.[2] 刘文萍,等. 美人蕉茎尖组织培养及快繁技术[J]. 北方园艺, 2001(6): 32.[3] 丁爱萍,等. 美人蕉组织培养及快速繁殖技术[J]. 园林科技, 2006(1): 11-12.[4] Singh N D, et al. The effect of TDZ on organogenesis and somatic embryogenesis in pigeonpea (Cajanus cajan L. Millsp)[J].Plant Science, 2003,164(3): 341-347.[5] 王关林,等. 高活性细胞激动素TDZ 在植物组织培养中的应用[J]. 植物学通报, 1997,14(3): 47-53.[6] 宣朴,等. 生姜茎尖组培快繁技术研究[J]. 西南农业学报, 2004,17(4): 484-486.[7] Kromer K, et al. In vitro cultures of meristem tips of Canna indica L.[J]. Acta Horticulturace, 1985,167: 279-286.[8] Vendrame W A, et al. In vitro propagation and plantlet regeneration from Doritaenopsis Purple Gem 'Ching Hua' flowerexplants[J]. HortScience, 2007,42(5): 1 256-1 258.[9] 刘敏. 花卉组织培养与工厂化生产[M]. 北京: 地质出版社, 2002: 101-102.

园艺（horticulture），即园地栽培（gardenhusbandry），果树、蔬菜和观赏植物的栽培、繁育技术和生产经营方法。可相应地分为果树园艺、蔬菜园艺和观赏园艺。园艺一词，原指在围篱保护的园囿内进行的植物栽培。现代园艺虽早已打破了这种局限，但仍是比其他作物种植更为集约的栽培经营方式。园艺业是农业中种植业的组成部分。园艺生产对于丰富人类营养和美化、改造人类生存环境有重要意义。为了方便地解析由于“gardening”的翻译和农业术语中的“园艺”一词发生同名冲突而出现两个“园艺”，这里把农业术语专用词的“园艺”叫做“专园艺”，把目前流行在普通大众语言中的“园艺”叫做“普园艺”。“专园艺对应的英语是“horticulture”，“普园艺”则对应于英语的“gardening”一词。园艺“普园艺”一般是指与园地活动有关的工作。也因人们运用词语所要表达意思的不同，故在不同的语言环境中，意思各不相同。随着现代化城乡的发展，高楼林立，道路纵横，地面空间逐渐减少，如何利用城镇居民房前屋后以及屋顶、室内、窗台、阳台、围墙等零星空间或区域，配合城市建设，美化庭院，加速绿化，已经越来越受到广大人民群众的重视。无论是在庭院、花园、屋顶、阳台或是室内等相关设施周围的有效空间，均见缝插针，进行人为地创造洁净优美的生活环境和幽雅舒适的工作条件。这对培养良好的道德风尚和社会风气，发展现代社会主义物质文明和精神都起到重要作用。 “专园艺”的栽培目的是生产优质作物，以期获得最大的经济效益，而“普园艺”方面的栽培则是观赏为主，生产为辅。因而，前者主要强调管理的科学性，而后者除要求管理的科学性外，一般情况下还要注意应用中的艺术性，要求将科学性和艺术性相结合，使之表现出观赏和实用双重价值。近些年来，随着人民环境意识的不断增强，除了园林绿化之外，美化到生活环境中的各个角落的风尚正在逐渐形成，所以“普园艺”内容随着发展趋势已不限于指代利用观赏植物进行栽培有关的技术，开始重视造型艺术，使之向观赏艺术的方向发展。

1 总 则 为了规范我市园林绿化施工中移植大树的操作过程，保证移植后大树健康生长，提高移植大树的成活率，制定本规程。 本规程适用于天津市园林绿化大树移植的施工及验收。10cm以上的大苗和珍贵树木移植可参照执行。 本规程编制参照了《城市绿化工程施工及验收规范》（CJJ/T82―99）、《天津城市绿化工程施工技术规程》（DB29-68-2004）。 大树移植施工及验收除应执行本规程外，尚应符合国家和地方现行有关标准的规定2 术 语 大树 Big tree一般指胸径20cm以上的落叶乔木和胸径15cm（或高度6m）以上的常绿乔木。 胸径 Diameter of trunk乔木主干离地表面 m处的直径。 种植土 Soil for Planting理化性质良好，适宜于园林植物生长的土壤。 种植土层厚度 Thickness of Planting Soil Layer植物根系正常生长发育所需的土壤深度。 种植穴Plant Hole为种植植物挖掘的坑穴。 分枝点高 Height of trunk指从地表面到乔木树冠的最下分枝点的垂直高度。3 一般规定 大树移植应遵循适地适树的原则，符合改善环境、美化景观的目的，必须具备有关部门批准迁移的文件。 移植胸径20cm以上的落叶乔木、胸径15cm以上（或高度6m以上）的常绿乔木、冠幅3m以上（或高度4m以上）的灌木、地径5cm以上（或树龄超过20年）的藤本，属于大树移植。 移植前必须对大树进行鉴定,有移植价值的方可移植，速生杨、柳树、泡桐等寿命短的大树不宜移植。 大树移植应建立技术档案，包括移植方案、移植时间、地下情况、根部情况、施工记录、养护管理技术措施、验收资料、照片或影像资料。 大树移植应做好充分准备，移植操作应严格按照方案施工，移植后加强养护。4 移植前的准备工作 施工方应到现场调查大树的生长情况，包括树种、规格、生长势、发枝能力、病虫害情况，测量树高、树冠、胸径有关数据，了解树龄及栽植历史。 施工方应现场调查、核实、了解移植地点的地上地下管线分布、临近建筑物、共生树木、周围环境及交通状况，并清理大树移植现场。 在选定树木土台边界50cm外挖观测沟，了解地下土质情况、地下水位和根部生长情况。 根据树种及胸径大小确定箱板移植、软梯法移植、土台移植或裸根移植等移植方式和移植机械。 施工单位应编制移植方案，一般包括以下内容：1．大树的概况。2．现场平面布置、路线情况。3．程序。包括前期准备工作、移植时间、树冠和根系的修剪方法及修剪量、起苗运输、装卸、定植。4．质量保证措施。包括根系保护、促根技术、运输保护，支撑与固定、后期养护管理。5．机具设备、各工序协调、安全、文明施工、现场维护措施。 大树移植前的断根处理 需移植的大树应在1～2年前确定。规划等部门在确定需要移植大树时，应在施工前1～2年通知园林部门。 三年以上未做过移植或断根处理的大树，应在移植前1～2年进行断根处理；确因工期紧张的，至少提前6个月断根。 断根应分期、分区交错进行，其范围宜比挖掘范围小10cm左右，断根区应回填含腐殖质较多的土壤。 市政、通讯、电力等部门应配合做好大树移植工作，避免损伤移植树木树皮、树木根系、树木支撑5 土壤处理及种植穴挖掘 种植穴挖掘前，应了解地上和地下管线及隐蔽物埋设情况。 移植前应对栽植地做土壤的理化性质、地下水矿化度分析。土壤应达到全盐含量低于％，pH值在～之间。若土壤不符合以上条件，应对栽植土采取下列措施。1.当pH值小于或大于时，必须采取土壤改良措施。2.土壤全盐含量在～％时，应换土及扩大树穴。3.土壤全盐含量在％以上时，应采取综合改土措施。4.土壤容重在以上时，应改土或加入疏松基质。 种植穴土壤含有建筑垃圾、有害物质，均应采取客土或改良土壤措施，树穴必须放大。 根据树木与地上地下管线以及建筑物等应保持一定距离的要求，挖穴时应符合下列规定：1.大树定植时应与其他树木保持8～10m的距离。伏输电线路，树枝至电线水平距离与垂直距离均不小于100cm。6300伏到10000伏输电线路，树枝至电线水平距离及垂直距离均不小于300cm。3.大树中心与热力管道边缘水平距离不小于200cm，与其它各种地下管线边缘的水平距离均不小于150cm。4.树木与建筑物、构筑物的水平距离宜符合规定。 种植穴地下水位过高时，应埋设排水管道或抬高地面。 种植穴的定点应符合下列规定：1.位置准确、标明中心位置和栽植穴边线。2.种植穴大小、深浅，应根据大树规格、土台大小、形状和土壤情况而定，穴的直径比土台大30～40cm，深度比土台高度深20～30cm。 种植穴应施足底肥，并准备足量的栽植土用于定植。6 修 剪 树冠修剪量应根据树种习性、树冠生长状况、移植季节、运输条件、挖掘方式、栽植地条件等因素确定，修剪后宜保留原有树形。 根系修剪应保持树体根冠比平衡，将劈裂根、病虫根、过长根剪除。 修剪应符合下列规定：1.落叶树的修剪，在保持原有树形的情况下，去除病虫枝，适当疏枝，对二级以下分枝作疏减或短截，多留生长枝和萌生的强枝。修剪量可达树冠的30%～60%。未采取移植前断根处理或在非适宜季节移植的树木修剪，应采用去其枝桠、保留主枝的修剪方式。2.针叶树以疏剪为主，剪除病虫枝、枯死枝、弱枝、过密枝。修剪量不超过20%～40%或不修剪。 剪口不得劈裂，不留毛茬，修剪直径2cm以上大枝及粗根，截口削平，并涂防腐剂。小枝短截时应保留外向芽。7 起 苗 根据大树习性，选择最适宜时期起苗。移植适宜期如下：1.早春，土壤解冻后树木展叶前。2.深秋，秋梢停止生长，进入休眠期以后。3.初冬，土壤冻结以后。 移植方法选择 生长正常、易成活的落叶树木，在正常移植季节可用带土台或裸根法移植。 常绿树木、生长较弱和较难移植的落叶树木，应采用带土台方法移植，必要时放大土台并用硬材料包装法移植。 生长正常的落叶树木在非适宜季节移植的应采用带土台方法或软梯法移植。 大树起苗前应喷抗蒸腾剂，并用草绳或麻布包扎树干及主枝。 起苗前应做好树冠扎缚和支撑。支撑时可用3根戗木，辅以垫层固定在树木的大侧枝或主干上，防止树体倾斜、摇动；或用三根绳固定树体，其中一根必须在主风向上位，其他两根均匀分布。 起苗应符合下列规定：1.挖掘前，在树干上作阳面标记。2.裸根苗应按胸径的8～10倍保留根系，遇大根必须用利铲铲断或手锯锯断，做到切口平滑，不损伤根皮，尽量保留护心土。根系截口直径大于2cm的，应涂防腐剂。3.带土台移植的树木按照胸径的6～8倍，对土台定点放线，并以白灰和木桩加以标识。4.在标识线外开沟挖掘，沟宽1m，深，遇有3cm以上侧根锯断。挖沟出现积水时，应先在四周挖排水沟和收水井，排除积水。5.刨土台时，必须挖到根系分布层以下，如需放倒树木，必须先切断所有主根。6.修整土台去表土，土台形状根据不同树种和根系发育情况，可刨高台或扁台。遇大根必须用利铲铲断或手锯锯断，做到切口平滑，不损伤根皮，少伤断根后新萌的嫩根。7.打络形式和层数应根据土台大小、土质情况、吊运条件而定，络绳必须用松三股或紧三股麻绳，严禁用草绳，绳距不大于5cm，并收紧。8.扎腰箍，宽度为土台腰度的2/3处，并以45°角收底。9.选用外部规格与土台规格一致的木板或钢板作箱板，箱板必须能承受带土台树木的重量。箱板固定时，土台底部必须封底，四周贴紧土台。10.软梯法移植大树，制作软梯的主绳直径和强度必须能承受土台重量。横向软梯用于加固包装土台，长度与土台边长一致，竖向软梯与土台高度一致，用于吊装。 起吊树木时，吊装机械受力后，方可拆除绳索或戗木支撑。 大树吊装和运输的机械必须具备足够承载能力。起吊部位必须选在重心部位，在受力的主干部位加厚垫层或在软包装的土台与起吊绳之间垫木板以避免树皮损伤和土台散落。8 运 输 起苗后当天运输，当天栽植，如当天不能栽植的，应将移植树木卸载到种植穴并固定。 大树装卸应缓慢起吊，缓慢卸吊，不得损伤树体和造成土台散落。 装运过程中应固定树干，树冠向后，将土台垫稳，用绳索将树木与车身紧紧拴牢，避免损坏土台和损伤树皮，并采用保水措施。 运输时车上必须有人押运，遇有电线等影响运输的障碍物，必须排除后，方可继续运输。9 栽 植 大树栽植方法应符合下列要求：1.植入种植穴前，应检查种植穴大小及深度，使其符合根系生长要求。土台底部有散落的，应在树穴相应部位填土，以避免树穴空洞。2.视土台的高度回填树穴，保持根颈部位高出地面5cm左右。3.在吊装就位时，应保持大树原栽植方向。4.不易腐烂的包装物必须拆除。用戗木或绳索支撑固定树体，拆除箱板，对树根喷施生根激素。5.将事先准备的表层土，掺适量有机肥或适量加入粗砂均匀拌合，填入树穴，边填入边夯实，避免根系周围出现空隙，回填至高于根颈5cm左右，做好水圈。6.栽植后当时浇透第一遍水，三天内浇第二遍水，浇足浇透。该期间注意填平树穴周围出现的下沉部位。7.大树栽植后必须进行支撑及围护。人流量大的广场、人行道，还应铺设透气材料。8.栽植后应保持至少一个月的树冠喷雾和树干保湿。树干保湿可采用草绳将树干全部包扎起来，每天早晚各喷水一次。 大树移植后应做好修剪、剥芽、叶面施肥、浇水、排水、设置风障、荫棚、包裹树干、防寒和病虫害防治等养护管理工作。 大树的支撑宜用三角支撑，并在树干的分枝点以上部位用粗麻绳固定。三角撑的一根戗木必须支撑在迎风方向，三根戗木均匀分布。 当移植树木随地面下沉时，应及时松动支撑，避免吊桩。10 移植后养护管理 树木定植后必须精心养护管理二年，并作好养护管理日志。 大树浇水应符合下列规定：1.栽植后应将种植穴周围围堰踏实。～15天浇第三遍水，然后及时封穴。以后根据天气情况及墒情及时浇水或树冠喷雾。3.浇水忌水流过急。如穴土沉陷、大树倾斜，应及时扶正培土。4.冬季树液停止流动时，应浇透冻水并封穴；早春树液开始流动或小枝发绿时，应敞开树穴浇返青水。 大树种植后，应做好以下养护管理工作：1.定期中耕除草；及时防治病虫害；有旱情时即时浇水，雨后即时排涝，减少树木生长的不利因素。2.根据树木生长情况及时施入速效肥或有机肥。3.适时进行修剪。修剪的原则是以修剪病虫枝、受伤枝、枯死枝、过密枝为主，保持大树的自然树形和树势均衡。树木成活后的第二年开始抹芽。留芽应根据树木生长势及今后树冠发展要求进行，多留高位壮芽，疏掉密生丛芽。截干的大树应培养定形主枝。4.当空气干燥时，应对树干、树冠、树干包扎物早晚各喷雾一次以增加树体湿度；在干旱季节可向树冠喷施抗蒸腾剂，降低蒸腾强度。5.落叶乔木出现大量落叶时，及时查明原因，采取有效措施，促使新芽萌发。6.树木周围不得堆物或进行影响树木成活的作业，防止人为损坏。7.临近建筑工地的移植树木，应在树冠外2m，设围栏保护。8.常绿乔木的越冬防寒，应架设风障，在大树的西北方向距树处架设风障，风障高度超过树高30cm以上。落叶乔木应在冬季采用培土、主干密实缠绕草绳或防寒布，树干涂白等措施进行防寒。9．定期检查树木支撑设施，出现松动时及时加固，避免风倒等事故发生。

植物组织培养及其应用研究概况在世界各国科学家的不断努力下，近几十年来，植物组织培养技术迅速发展。利用组织培养，不仅可以大量生产优良无性系，获得人类需要的多种代谢物质，还可获得单倍体、三倍体、多倍体及非整倍体。通过细胞融合可以打破种属间的界限，克服远缘杂交不亲合性，在植物新品种的培育和种性的改良中发挥了巨大作用。组织培养的植物细胞是在细胞水平上分析研究的理想材料，从植物快繁、花药培养发展到细胞器培养、原生质融合以及DNA重组技术等，植物组织培养技术广泛应用于植物科学的各个领域及农业、林业、工业、医药等多种行业，已经成为当代生物科学中最有生命力的一门学科。1 植物组织培养的基本概念、原理和试验步骤1．1概念植物组织培养是在无菌条件下，将离体的植物器官(根尖、茎尖等)、组织(形成层、花药组织等)、细胞(体细胞、生殖细胞等)、胚胎(成熟或未成熟的胚)、原生质体等在人工配制的培养基上培养，给予适宜的培养条件，诱发其产生愈伤组织或潜伏芽或长成完整的植株的技术。1．2原理 植物组织培养的依据是植物细胞的“全能性”及植物的“再生作用”。1902年，德国著名植物学家 G．Haberlandt根据细胞学理论提出了一个观点，“高等植物的器官和组织可以不断分割，直至单个细胞，即植物体细胞，体细胞在适当的条件下具有不断分裂、繁殖并发育成完整植株的潜力”。1943年，美国人White在烟草愈伤组织中偶然发现形成一个芽，证实了G．Haberlandt的论点。 不同植物所需要的生长条件不同，所用的培养基也有所不同。较常用的基础培养基有MT、MS、 SH、N6、White等。在组织培养中，愈伤组织和胚状体能否形成是培育出新植株的关键。通过在基础培养基里添加一定浓度的外源激素，可以诱导出愈伤组织、胚状体、不定芽、根等器官，最终获得再生植株或次生物质。 用于植物组织培养的材料称为外植体，其主要形式有器官、胚胎、单细胞、原生质体等。根据外植体的不同，所需要的培养基种类、培养条件、外源激素的种类及比例等均不同。植物组织培养中，影响培养力的因素是多方面的，诱导愈伤组织成败的关键在于培养条件，植物激素是诱导愈伤组织和绿苗分化的关键因素。最常用的诱导愈伤组织的生长素是IAA、NAA和2，4一D，所需浓度为O．01～10 mg／L。最常用的细胞分裂素是KT和ABA，使用浓度为O．1～10 mg／L。KT的主要作用是促进细胞分裂和愈伤组织分化。ABA对植物体细胞胚的发生与发育具有重要作用。各类植物激素的生理作用虽有相对专一性，但是植物的各种生理效应是不同种类激素之间相互作用的综合表现。1．3试验步骤1．3．1选择和配制培养基 培养基是植物组织培养中的“血液”，血液的成分及其供应状况直接关系到培养物的生长与分化，因此了解培养基的成分、特点及其配制至关重要。1．3．2灭茵灭菌是组织培养中的重要工作之一，通常采用物理的或化学的灭菌方法。培养基用常压或高压蒸煮等湿热灭菌、器械采用灼烧灭菌、玻璃器皿及耐热用具采用干热灭菌、不耐热的物质采用过滤灭菌、植物材料表面用消毒剂灭菌、物体表面用药剂喷雾灭菌、接种室等空间采用紫外线或熏蒸灭菌。1．3．3接种将已消毒好的根、茎、叶等离体器官，经切割或剪裁成小段或小块放入培养基，整个接种过程要在无菌条件下进行。 ．4培养把培养材料放在有一定光照和温度等条件的培养室里，使之生长、分裂和分化，形成愈伤组织或进一步分化成再生植株。1．3．5试管苗驯化移栽 试管苗是在特殊环境条件下生长的幼苗，与自然生长的幼苗有很大差异，只有通过驯化，使之适应自然环境后才能移栽。2 植物组织培养的应用2．1植物快速繁殖和无病毒种苗生产植物快速繁殖技术始于20世纪60年代，法国的Morel用茎尖培养的方法大量繁殖兰花获得成功，从此揭开了植物快速繁殖技术研究和应用的序幕。目前，通过离体培养获得小植株并且具有快速繁殖潜力的植物已有100多科1 000种以上，有的已经发展成为工业化生产的商品。世界上80％～85％的兰花是通过组织培养进行脱毒和快速繁殖的。培养的植物种类也由观赏植物逐渐发展到园艺植物、大田作物、经济植物和药用植物等。在我国，同类的研究始于20世纪70年代。马铃薯无毒种薯和甘蔗种苗已在生产上大面积种植，30余种植物已进行规模化生产或中间试验。利用组织培养进行植物快速繁殖及无病毒种苗生产，不仅能够挽救珍惜濒危物种，而且能够解决植物野生资源缺乏的问题。2．2植物花药培养和单倍体育种 将植物花药培养成单倍体植株，再经过染色体加倍，能很快得到纯合的二倍体，这样将大大缩短育种年限。到目前为止，世界上通过花粉和花药培养已获得了几百种植物的单倍体植株。印度科学家应用这种方法培育的水稻品系，比对照产量提高15％～49％。韩国先后育成了5个优质、抗病、抗倒伏的水稻品种。我国自20世纪70年代开始该领域的研究，已经培育了40余种由花粉或花药发育成的单倍体植株，其中有10余种为我国首创。玉米获得了100多个纯合的自交系；橡胶获得了二倍体和三倍体植株。仅“九五”期间就育成高产、优质、抗逆、抗病的农作物新品种44个，种植面积超过660万 hm2。2．3植物胚胎培养杂交育种中，杂种胚常常败育，因此将早期生长的胚取出，应用组织培养方法，就有可能培育出杂交植物。已经有100篇以上幼胚培养成为植株的报道。国内外科学家应用植物胚胎培养技术获得了多种远缘杂交的重组体、栽培种和杂交品种。2．4植物愈伤组织或细胞悬浮培养利用植物愈伤组织或细胞悬浮培养可以生产用于预防和治疗疾病的植物次生代谢产物。近年来，这一领域的发展极为迅速，已经研究了400多种植物，从培养细胞中分离到600多种次级代谢产物，其中60多种在含量上超过或等于原植物，20种以上干重超过原植物的1 9，6。例如，从薯芋愈伤组织和悬浮细胞生产的diosgenin用于合成甾体药物。最近抗癌药物紫杉醇一红豆杉细胞培养物，可用75t发酵罐培养，已达到商业化生产水平。另外，达到商品化水平的还有紫草、人参、黄连、老鹳草等；长春花、毛地黄、烟草等已实现工业化生产；牙签草、红花等20多种植物正在向商品化过渡。2．5细胞融合与原生质体培养自1960年英国学者Cocking首次利用纤维素酶从番茄幼苗的根分离原生质体获得成功以来，到1990年已有100种以上植物的原生质体能再生植株。我国获得了30余个品种的原生质体再生植株，其中包括难度较大的重要粮食作物和经济作物，如大豆、水稻、玉米、小麦、谷子、高梁、棉花等。在木本植物、药用植物、蔬菜和真菌原生质体培养方面的进展也十分迅速。国外已先后获得了种内及种间的体细胞杂种植株。植物原生质体培养还可应用于外源基因转移、无性系变异及突变体筛选等研究，因而越来越受到人们的重视。2．6植物细胞突变体筛选植物细胞突变体的筛选最早始于1959年，G． Melchers在金鱼草悬浮细胞培养中获得了温度突变体。1970年，P．S．Carlson，H．Binding和Y．M． Heimer等分别分离出烟草营养缺陷型细胞、矮牵牛抗链霉素细胞系及烟草抗苏氨酸细胞系。迄今为止，已经在不少于15个科45个种的植物细胞培养中筛选出100个以上的植物细胞突变体或变异体。其中包括抗病细胞突变体，如玉米抗小斑病突变体和小麦抗赤霉病、根腐病突变体；抗氨基酸及其类似物细胞突变体，如甘蓝型油菜抗HYP突变体[263；抗逆境胁迫细胞突变体，如水稻耐盐突变体和小麦抗盐突变体；抗除草剂细胞突变体及营养缺陷型细胞突变体，如玉米抗除草剂变异体；株高突变体的筛选，如水稻矮秆变异体。2．7植物体细胞胚胎和人工种子1958年，Reinert在胡萝卜的组织培养中最先发现了体细胞胚胎(胚状体)。据不完全统计，能大量产生胚状体的植物有43科92属100多种。一些重要作物如水稻、小麦、玉米、珍珠谷等，也能通过离体培养产生胚状体。这些胚状体用褐藻酸钠等包埋，再加上人工种皮，就形成了人工种子。人工种子的优点是：繁殖快速，成苗率极高；不受气候影响，四季皆可工厂化生产。上世纪80年代初，美、日、法等国家相继开展了人工种子的研究，我国也于“七五”期间开展了此项研究，并于1987年列入了国家“863”高技术研究发展计划。2．8 植物组织细胞培养物的超低温保存与种质库建立植物细胞全能性的发现和证实，为植物种质资源的长期保存开辟了一条新途径。采用液氮超低温保存技术，能保持很高的存活率，并且能再生出新植株和保持原来的遗传特性。如建立茎尖分生组织培养物的超低温保存种质库，不仅可以防止种质的遗传变异和退化，而且可以长期保存无病毒的原种。2．9 植物组织培养与转基因技术的应用 我国第一个T—DNA插入突变体库的构建和研究为我国水稻功能基因组学研究奠定了良好的技术和材料基础，为确保我国拥有一批有自主知识产权的基因资源做出了积极贡献。由中国水稻研究所农业部水稻生物学重点开放实验室和中科院上海植物生理研究所合作，通过建立大规模、高效的农杆菌介导的转基因技术体系，将玉米转座子Ac—Ds等外源基因导入水稻未成熟胚和种子诱导的愈伤组织，获得了1．2万个独立的T—DNA插入株系，并构建了水稻突变体的数据库。 3 展望植物组织培养研究与应用是20世纪科技进步的重大成果之一，为研究植物生长发育、抗性生理、激素及器官发生与胚胎发生等提供了许多良好的实验材料和有效途径。植物组织培养方法不断提高的同时，也相应拓宽了其应用范围。由于组织培养在人工控制的条件下进行，容易掌握花芽分化和开花成因；通过胚胎培养，能够得到杂种或自交种；通过分离单倍体细胞，能培育纯合的二倍体优良品系；提高育种多样性的同时缩短了育种时间；通过突变体筛选，提高植物的品质，增强抗逆境胁迫能力，扩大植物的生长范围；将体细胞冷藏在低温下，建立基因库，达到保存物种的目的；获得药用价值高和工业生产所需要的次生产物，加快药物生产的时间并且减少了单纯依靠天然植物的被动性。植物组织培养技术已经渗透到科研、生产和生活各个领域，必将日臻完善。黑龙江农业科学2006，(3)