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基因是DNA分子上的一个功能片段,是遗传信息的基本单位,是决定一切生物物种最基本的因子;下面是我整理了基因检测技术论文,有兴趣的亲可以来阅读一下!

病毒基因的检测

【关键词】 病毒基因 检测

一 乙型肝炎病毒DNA(HBV-DNA)测定

乙型肝炎是由乙肝病毒引起的以肝脏损害为主要临床特征的急、慢性传染病,严重者可 发展成慢性肝炎、肝硬化和肝癌。在我国,乙肝是危害人类健康的一种主要传染病。

【 参考值】

阴性 (Taqman荧光定量PCR技术)

【临床意义】

是乙型肝炎病毒感染的直接证据,是HBV有活性复制能力及具传染性的确切标志。

2.可定量检测HBV-DNA含量,为临床病情判断、疗效观察提供信息。

的出现先于其他血清学指标(如HBsAg),可早期诊断HBV感染。

4.正常人HBV-DNA为阴性。当HBV-DNA为101~104拷贝/ml时,表明病毒复制水平低,传染性较弱;而当 HBV-DNA>104拷贝/ml时,表明病毒复制水平高,传染性强。

含量测定可为临床药物选择提供依据。

【注意事项】

1.标本可用血清或血浆,避免肝素抗凝,避免反复冻融。

2.标本室温放置不超过4小时。

3.溶血、高胆红素标本影响检测结果。

二 其他病毒DNA测定

(一)人乳头瘤病毒DNA(HPV-DNA)检查

人乳头瘤病毒是一种小的双链DNA病毒,根据核酸相关性分型已发现70余型。该病毒可以感染人的皮肤和黏摸上皮细胞,诱发细胞增生,产生乳头瘤样病变。

【参考值】

阴性 (多重核酸荧光定量PCR技术)

【临床意义】

难以用传统的病毒培养及血清学技术检测,目前主要采用分子生物技术检测HPV-DNA,灵敏度高。

2.可对尿道、阴道、宫颈脱落细胞进行人乳头瘤病毒的检测及分型,判断体内HPV感染状况。

6和11型与尖锐湿疣、喉头鳞状上皮乳头状瘤发生有关;HPV 16、18、31、32型等与宫颈癌发生相关。因此,可用于对HPV高危亚型的诊断,对尖锐湿疣、宫颈癌等疾病的诊断与筛查具有重要意义。

检测可用于考核疗效与预后。

【注意事项】

1.用无菌拭子取尿道、阴道、宫颈分泌物于无菌试管或无菌瓶中。

2.标本采集应严格按无菌操作,避免污染。并及时送检。

(二)人类巨细胞病毒DNA(HCMV-DNA)检查

HCMV是疱疹病毒科成员,人类普遍易感,多为隐性或潜伏感染。在免疫功能低下、缺陷或抑制情况下,可发生成人HCMV感染,常呈弥漫性病变,严重者甚至死亡。

【参考值】

阴性 (荧光探针杂交PCR技术)

【临床意义】

1.用于临床HCMV感染的快速诊断。

2.用于临床免疫抑制 治疗过程中体内HCMV感染的快速诊断与疗效监测。获得性免疫缺陷综合征等患者HCMV感染的诊断与疗效监测。

技术检测HCMV的敏感性高,且HCMV-DNA的出现早于临床症状或血清学标记物的出现,可早期诊断 HCMV感染。

4.妊娠早期感染HCMV可引起胎儿先天畸形,产前检测HCMV-DNA有利于优生优育。

5.连续监测巨细胞病毒的含量变化可了解病毒的复制状况,从而为疾病的早期诊断与药物疗效提供直接的病原学依据。

【注意事项】

采用EDTA抗凝全血或脑脊液标本,采集后及时送检。

(三)单纯疱疹病毒DNA(simplex herpes virus, HSV-DNA)

单纯疱疹病毒是一种有囊膜的双股DNA病毒,分为I型和II型。近年来,HSV是性传播疾病、病毒性脑炎等疾病的重要病原体。

【参考值】

阴性 (荧光探针PCR技术)

【临床意义】

1.用于检测人血清样本或体液样本中的单纯疱疹病毒并可同时分型,辅助诊断HSV感染性疾病。

I型感染主要引起口唇疱疹、疱疹性结膜炎、脑炎和皮肤性疱疹,HSV II型主要引起生殖器疱疹, HSV-DNA检测可辅助诊断上述疾病,并可用于考核疗效与预后。 【注意事项】

1.血清用无菌注射针头抽取静脉血2ml于无菌肝功管中。

2.分泌物用无菌棉拭子采集标本,女性取宫颈或阴道分泌物,男性取精液或前列腺液,将取样后的棉拭子放入无菌试管或无菌瓶中。

3.脑脊液抽取脑脊液于无菌玻璃瓶中。

(四)EB病毒DNA(EB virus,EBV-DNA)

EBV属于丫疱疹病毒科,主要经涎液传播,PCR技术可灵敏地检测出标本中的EBV-DNA,满足临床诊断、 治疗需要。

【 参考值】

阴性 (荧光探针杂交PCR技术)

【临床意义】

1.可快速检测血液、脑脊液、组织、尿液中的EB病毒,为EB病毒感染提供直接证据。

病毒临床上与鼻咽癌传染性单核细胞增多症、霍奇金病等的发病密切相关。

【注意事项】

1.检测标本可采用EDTA抗凝全血、脑脊液、咽拭子、尿液、病变组织等。

2.标本采集时严格按无菌操作,并及时送检。

三 RNA病毒测定

丙型肝炎病毒RNA(HCV-RNA)检测

丙型肝炎病毒是一种单链正股RNA病毒,引起丙型病毒性肝炎。丙型病毒性肝炎多因输血或血制品而引起,在输血者中还存在无症状的HCV携带者。

【参考值】

阴性(RT-PCR,荧光定量PCR技术)

【临床意义】

1.有助于HCV感染的早期诊断。

阳性提示HCV复制活跃,传染性强。

转阴提示HCV复制受抑,预后较好。

4.连续观察HCV-RNA,结合抗-HCV的动态变化,可作为丙肝的预后判断和干扰素等药物疗效的评价指标。

【注意事项】

1.标本可用血清或血浆,用无菌注射针头抽取静脉血2~3ml于无菌肝功管或EDTA抗凝管中送检。避免肝素抗凝,避免反复冻融。

2.标本室温放置不超过4小时。

3.溶血、高胆红素标本影响检测结果。

参 考 文 献

[1]杨振,祁自柏,李河民.病毒基因检测技术的 发展趋势. 《 中国生物制品学杂志》,2006年01期.

[2]徐丽.利用基因工程进行PHB相关基因的克隆和烟草转化[D].山东师范大学,2000年.

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小洲洲大肚皮

近日,香港中文大学的卢煜明(Dennis Lo)教授团队,基于液态活检技术,通过检测Epstein-Barr病毒的DNA,在鼻咽癌筛查中进行尝试,结果可提高该疾病的早期检测和生存率。表明此方法至少对于这种在当地普遍存在的癌症是有效的。该项研究于8月10日在线发表在新英格兰医学杂志(NEJM)上。

总共有20174名40~62岁的受试者接受了EBV DNA筛查,1112人()在血浆样本中检测到EBV DNA。

309人(占所有受试人群的,最初检测为阳性人群的)重复检测的结果持续为阳性。在这309名受试者中,有300人进一步接受内镜检查,275人接受了内镜检查和MRI检查;其中34人(11%)诊断为鼻咽癌。在筛查出的鼻咽癌患者中,I期或II期鼻咽癌的患者比例明显高于历史对照组(71% vs. 20%,P < ),大约半数(n=16 [47%])为I期,显著高于既往文献报道的5%~7%。筛查后诊断为鼻咽癌的患者,其3年无进展生存率优于历史对照组(97% vs. 70%;P<)。

9名受试者拒绝接受进一步的检查,其中1人在入组32个月后发生鼻咽癌晚期。在筛查后1年内,仅1名血浆样本EBV DNA检测阴性的受试者出现鼻咽癌。血浆中EBV DNA在鼻咽癌筛查中的敏感性和特异性分别为和。

图:鼻咽癌阶段的分布和生存率的变化

研究结论:血浆样本EBV DNA分析有助于早期无症状鼻咽癌的筛查。EBV DNA筛查使鼻咽癌更早被发现,患者结局明显优于历史对照组。

(本研究由嘉道理慈善基金会及香港研究资助局资助)

. Allen Chan, et al. Analysis of Plasma Epstein–Barr Virus DNA to Screen for Nasopharyngeal Cancer. N Engl J Med 2017; 377:513-522.

BACKGROUND:Circulating cell-free Epstein-Barr virus (EBV) DNA is a biomarker for nasopharyngeal carcinoma. We conducted a prospective study to investigate whether EBV DNA in plasma samples would be useful to screen for early nasopharyngeal carcinoma in asymptomatic analyzed EBV DNA in plasma specimens to screen participants who did not have symptoms of nasopharyngeal carcinoma. Participants with initially positive results were retested approximately 4 weeks later, and those with persistently positive EBV DNA in plasma underwent nasal endoscopic examination and magnetic resonance imaging (MRI).RESULTS:A total of 20,174 participants underwent screening. EBV DNA was detectable in plasma samples obtained from 1112 participants (), and 309 ( of all participants and of those who initially tested positive) had persistently positive results on the repeated sample. Among these 309 participants, 300 underwent endoscopic examination, and 275 underwent both endoscopic examination and MRI; of these participants, 34 had nasopharyngeal carcinoma. A significantly higher proportion of participants with nasopharyngeal carcinoma that was identified by screening had stage I or II disease than in a historical cohort (71% vs. 20%, P< by the chi-square test) and had superior 3-year progression-free survival (97% vs. 70%; hazard ratio, ; 95% confidence interval, to ). Nine participants declined to undergo further testing, and 1 of them presented with advanced nasopharyngeal carcinoma 32 months after enrollment. Nasopharyngeal carcinoma developed in only 1 participant with negative EBV DNA in plasma samples within 1 year after testing. The sensitivity and specificity of EBV DNA in plasma samples in screening for nasopharyngeal carcinoma were and , respectively.

CONCLUSIONS:Analysis of EBV DNA in plasma samples was useful in screening for early asymptomatic nasopharyngeal carcinoma. Nasopharyngeal carcinoma was detected significantly earlier and outcomes were better in participants who were identified by screening than in those in a historical cohort. (Funded by the Kadoorie Charitable Foundation and the Research Grants Council of the Hong Kong government; number, NCT02063399 .).

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