维生素c检测方法的优化论文

目前研究Vc测定方法的报道较多，有关Vc的测定方法如荧光法、2,6-二氯靛酚滴定法、2,4-二硝基苯肼法、碘量法、光度分析法、化学发光法、电化学分析法及色谱法等，各种方法对实际样品的测定均有满意的效果。为了解国内Vc含量测定方法及其应用方面的现状及发展态势。方法以"Vc或抗坏血酸和测定"为检索词对1994～2002年中国期刊网全文数据库(CNKI)中的理工A、B和医药卫生专辑进行篇名检索，对所得有关Vc含量测定的文献数据分别以年代、作者区域、载刊等级、样品类型、测定方法等进行计量分析。结果核心期刊载刊文献占文献总量的45.06％，其中光度法占65.69％，电化法占18.63％，色谱法占12.75％；复杂被测样品文献占文献总量的45.06％，其中光度法占60.92％，色谱法占19.54％，电化法占10.34％。结论目前国内Vc含量测定仍以光度法为主流，但近年来色谱法，特别是HPLC法上升趋势尤为明显。 1.4.1还原型Vc的测定 1.4.1.1 2,6-二氯酚靛酚法(2,6-D法) 其原理是利用2,6-二氯酚靛酚钠盐(C12H6O2NCl2Na)在酸性条件下将还原型抗坏血酸氧化成氧化型抗坏血酸，而其本身被还原成无色的衍生物；当还原型抗坏血酸全部被氧化时，过量的2,6-二氯靛酚钠盐呈现红色，指示终点。该方法适于测定无色和浅色样液或提取液中的AsA，无须特殊仪器，操作简便、快速、准确[7]。 由于大多数果蔬和其制品有颜色，影响了终点的准确性。使用白陶土脱色[8]和加1,2-二氯乙烷[9]均不能得到理想的结果。作为对该法的改进，向一定量的AsA提取液中加入过量2,6-D与AsA作用后，剩余的2,6-D被二甲苯萃取、比色。样液中AsA含量与二甲苯萃取液中浅红色呈线性负相关。因花青素不溶于二甲苯，故可测定深色样品[10]。应用流动注射分析(Flow Injection Analysis,简称FIA)，使该法的分析速度更快(120样品/h)、灵敏(检出限0.5 ug/ml)[11]。由于2,6-二氯靛酚和还原型抗坏血酸具有不同的电位(2,6-二氯靛酚的氧化还原电位是150mV，AsA的氧化还原电位是100 mV)，利用铂和氯化银复合电极测定其电位差的变化，可准确地测定样液中AsA的含量。该法适宜色泽较深样品中AsA的测定。溶解氧测定是利用极谱分析法原理进行的,其基本电路与电位滴定相似[12]。但样品中同时存在的Fe2+、Sn2+、SO2、SO3、S2O32-等还原性杂质对本法则有干扰。扣除样品中内源还原性物质是对2,6-二氯靛酚法的一个改进[13]。 1.4.1.2 碘量法 其原理是基于AsA还原碘，自身氧化DAsA,而碘可由碘酸钾还原碘化钾来得到，当多余碘存在时，淀粉呈蓝色，指示终点。反应式如下: KI+KIO3+6H→2K++3H2O+I2 (1-1)还原型抗坏血酸+I2+2H+→氧化型抗坏血酸+2HI 该法简便，但在测定深色样品时，准确度欠佳[14]。 1.4.1.3 分光光度法 其原理是三价铁离子被AsA还原二价铁离子，后者与4,7-二苯基-1,10-菲咯啉(Bathophenanthroline, BP)生成红色络合物，其强度与样品中AsA含量有化学计量关系。该法具有快速，灵敏的优点；此外，样品中DAsA还可被Dithiothreitol (DTT)还原为AsA，同时测定DAsA的含量[15]。 采用流动注射分析停留技术还可实现AsA与果蔬常用抗褐变剂L-半胱氨酸的同时测定[16]。 1.4.1.4 间接光度法 测定是在pH=5.0的乙酸-乙酸钠缓冲溶液中，抗坏血酸与铁(III)和1,10-二氮杂菲溶液相互作用，形成橘红色的Fe(II)-二氮杂菲络合物，在波长510 nm处，吸光度与50mL抗坏血酸含量在10~200ug浓度内呈线性关系。该法的特点是简便快速，灵敏度高，干扰少[15]。 1.4.1.5 紫外光度法 其原理是还原型Vc(AsA)在紫外区243.8nm处有最大吸收峰，以Cu2+作催化剂，利用溶解氧，将在243.8nm处有最大吸收的AsA选择性氧化为243.8nm处无最大吸收峰的DAsA，进行本底校正，此法具有简便、快速、准确的特点[17]。 1.4.1.6 光电比浊法 其原理是在酸性提取液中的AsA，可被亚硒酸氧化成DAsA，后者还原成元素硒，在一定条件下，其溶液中形成稳定的悬浊液。当20~50mL浸出液中AsA含量在0~4mg时，浊度与AsA含量成正比。样品中含有单宁、山梨酸、还原酮类不干扰测定。Fe2+、SO2在常温下干扰不明显，仅亚锡离子有干扰[18]。 1.4.1.7 高效液相色谱法(HPLC) 此法的优点不仅操作简便，分离时间短，对结构不稳定的Vc尤为适合；缺点是所用仪器较为昂贵[20]。 1.4.1.8 极谱法 其原理是用溴水将AsA氧化成DAsA，而后者与邻苯二胺缩合，可用于极谱定量测定Vc含量。脱氢型的还原糖、还原酸等对测定有干扰，可用氯仿萃取分离干扰物质后进行测定[18]。 1.4.2 Vc总量的测定 1.4.2.1 2,4-二硝基苯肼法 此法为测定Vc总量最常用的方法。其原理是用活性炭把AsA氧化成DAsA，在pH5以上时，后者分子重排，其内酯环裂开生成2,3-二酮古乐糖酸(DKG)，与硝基苯肼偶联，生成红色的脎，其呈色强度与DKG浓度成正比；如果再测定出DKG、DKG + DAsA的含量，则可计算出AsA、DAsA的含量。该法虽然测试过程长、须严格掌握测试条件，但其准确度和精密度均较高[20]。 1.4.2.2 荧光分光光度计法 其测定Vc的基本原理是:样品中的AsA被氧化成DAsA，并与邻苯二胺反应，生成荧光物质喹喔啉(Quinoxaline)衍生物，荧光强度与DAsA的浓度成正比，用荧光计测定荧光强度。该法具有较强的专一性，样品中有些成分会造成干扰，可作空白试验校正干扰物质所产生的荧光。此法的优点是，生成荧光物质所需时间短，操作简单，能在短时间内测定Vc总量和分开测定AsA、DAsA的含量[19]。 1.4.2.3 过氧化物酶法 果蔬中的Vc在过氧化氢存在下，添加合成底物1,4-二氨基苯，通过过氧化物酶氧化显色，作为Vc氧化终点，然后比色测定。该法的特点是不需要昂贵的仪器，适应性强，容易掌握，费用低，检测快速，不需要预先纯化所分析的试样[20]。这个是我论文的综述部分，你看看吧！