sars研究论文

反向遗传学 被认为是一种不可或缺的工具，它彻底改变了我们对病毒发病机制和疫苗开发的认识。大型的RNA病毒基因组，如冠状病毒基因组，由于基因组较大且不稳定，很难在大肠杆菌宿主中克隆和操作。 两位通讯作者均来自瑞士的University of Bern Transformation-Associated Recombination cloning  TAR克隆 基因组DNA片段和过量的TAR载体在去除细胞壁的酵母细胞中进行混合。每个载体中都含有对目的基因特异的两段序列（标为蓝色和红色）以及酵母的筛选标记HIS3和CEN6（淡蓝色原点）。由于载体过量，酵母细胞便会将DNA片段全部接受。根据具体情况又可分为三类：1）未分到基因组DNA的；2）分到基因组DNA但未被整合到TAR载体上的；3）分到基因组DNA且通过自身同源重组被整合到TAR载体上的。显然我们是只需要第三种情况的阳性克隆，怎么把其它两种过滤掉呢？答案是进行电泳。 下图是对上述过程的简化示意： 2010年5月20日，J. Craig Venter Institute在美国 Science  杂志上报道了首例人造细胞的诞生。向山羊支原体  Mycoplasma capricolum  细胞中转入人工合成的蕈状支原体 Mycoplasma mycoides  的基因组而来，产生的人造细胞表现出的是蕈状支原体的生命特性。利用该平台，研究人员在拿到合成DNA片段后一周内，对新冠病毒进行了基因组改造和病毒拯救。研究团队于1月14日向试剂公司下单，以化学合成方式得到上述14个DNA片段，并在2月4日拿到其中的12个含片段载体（有pUC57、pUC19、pUC57mini和PCC1-His3）。其中片段5 和7 未获得，原因不详。研究团队最终通过对一位来自慕尼黑患者的新冠病毒样本（BetaCoV/Germany/BavPat/2020）进行RT-PCR 扩增，获得了第5和第7个片段。 利用TAR 克隆，研究人员获得了6 组正确组装的新冠病毒构建体的分子克隆。随后用酵母的同源重组系统依据末端重复的序列将这些DNA 序列拼到一起。获得完整的病毒序列后，用T7 RNA 聚合酶将其通过脱落转录，得到病毒RNA，将该RNA 用电穿孔技术导入到非洲绿猴肾细胞（VeroE6 cell）中，使其感染。将用于培养绿猴肾细胞（~2d），含释放出的病毒颗粒的上清液注入到别的培养基中，发现可以感染别的细胞，说明新构建的酵母合成平台可以拯救病毒。 同理，作者团队在鼠肝炎病毒A59（MHV-A59）和MERS-CoV进行病毒拯救的测试，发现效果依旧很好，测试的克隆中正确组装了病毒基因组的YAC均可达到90％，这表明病毒在酵母中的组装效率相当之高。 TAR 克隆系统的一个最重要的优点就是可以先对全基因组进行设计，通过对小的具有重复序列的片段的合成，进而再依靠酵母的同源重组系统进行片段的正确组装，极大的降低了合成的难度，也大幅提高了合成的效率。无需得到变异毒株的临床样本，通过对病毒变异的分析，可以合成构建出该变异毒株的基因组片段，再通过酵母平台进行重建与拯救。论文中还提到对局部片段的重新设计，以测试改变前后对病毒的影响。 总的来说，这一方法即利用酵母人工染色体在酵母体内将合成的SARS-CoV-2的DNA片段进行体外重组，获得全长cDNA克隆。再将cDNA体外转录为RNA，利用电穿孔将病毒RNA转染进哺乳动物细胞，实现病毒拯救。 化学合成的基因组DNA所产生的SARS-CoV-2可以绕开病毒分离物的来源限制，而且还可以对单个基因进行遗传修饰和功能表征。 对于这一篇论文，我起初有许多地方不明白。 首先是病毒的基因组合成，理论上讲，比病毒更高级的生物基因组，并不是没有人合成出来过，因此这篇论文的技术可以说是降维打击了，那为什么还可以发表在顶级杂志 Nature 上呢？ 从时间线上进行分析，我们可以得知，1月11日病毒序列正式被公布（据我所知应该是中国CDC发布的），但是国外第一个提取出病毒毒株的时间却是到了2月26日，与序列的公布整整相差1个多月。我们也可以知道这次的Pandemic，一个多月可以新增多少感染者和死亡者，时间就是生命啊！而作者在序列公布后的第3天便下出了订单，在ICTV正式公布新冠病毒名称的第2天便得到了拯救完成的病毒。可以想象，如果以后没有可能及时得到病毒的毒株，我们可以直接根据序列得到病毒的毒株， 这是本篇文章最大的亮点之一，即在此类形势下给人一种研究病毒的范式。 第二个亮点，可以关注到作者不仅做了SARS-CoV-2，还做了MHV和MARS-CoV。看不明白的话给个提示：这三种病毒都是冠状病毒科（Coronaviridae ）的！此外，作者在表格中还列出未实现拯救的人呼吸道合胞病毒（hRSV-B）、寨卡病毒（ZIKA virus）和流感病毒（HCoV）。这意味着作者想 通过对一系列冠状病毒的拯救验证来说明这一平台广泛的适用性 ，将难缠的冠状病毒，乃至其他病毒的毒株获取难度降低。这或许对科学界是件好事，但是可能也是件坏事吧… Craig Ventor；冠状病毒亚基因组； 《COVID-19全景综述》，为一张大图，涉及基本信息，免疫学过程等内容， 很震撼且 非 常华丽 ！在 公众号“炫亦”回复“cv”即可获得云盘链接！ [1] Thao, et al.  Nature  , 2020.  [2] Natalay Kouprina & Vladimir Larionov.  Nat Protocol  , 2008. [3] Daniel G. Gibson, et al.  Science  , 2010.  [4] 孙明伟, 李寅, 高福.  生物工程学报  , 2010.

从材料选取的2003年山东申论范文,与各位分享申论2003年山东申论试题范文：要求这道题是在阅读全部材料的基础上，自拟题目写一篇议论文。字数不超过1200字。题干中规定的非常明确，是“在阅读全部材料的基础上”。因此，这篇议论文绝对不可以是针对材料中四个层面中的一点进行论述，必须是就整篇材料的中心主旨进行论证，既就非典对我们产生的各种影响进行论证。论非典时期的典型启示一场突如其来的灾难，一场没有硝烟的战斗，人类的共同敌人非典给我们带来了痛苦，打破了我们以往的生活的节奏。非典对中国、对世界，虽然是一个突如其来、前所未有的灾难。但是，非典给人们提供了一些有益的启示。第一，政务公开应进一步改革。党和国家领导人的一举一动，政府有所作为的果断举措，对“非典”疫情及时准确地向民众通报，并提出了可行的解决措施，政府和民众形成了合力，政府已经疏通了和民众的沟通渠道。特别是政府对非典这一突如其来的灾难的处理，已经朝透明化的方向发展，这是对民众负责任的态度和表现。这种趋势如果是持久地发展下去，很有利于加快推进体制改革的进程。有可能成为推进改革的最大动力。第二，在应对各种危机的管理体制上，应有通盘考虑。在这次应对非典的行动中，国务院成立了由副总理吴仪牵头，包括多个部委一把手的指挥部，成为协同式最高危机管理部门。在危机结束之后，应当考虑如何将危机管理日常化。作为一个幅员辽阔的大国，如果没有一个相对独立的危机处理常设体系，就无法在日常状态下，建立各种预警机制，及时捕捉各种信息，把危机消灭于萌芽之中，同时总结积累各种危机管理经验，将其溶于我们日常工作的管理中。第三，我们每一个个人和整个社会，应从与非典的战斗中欲火重生。首先，每个人都应该具备一定的风险意识。长期的和平年代已使我们的风险和危机意识淡漠，应付突发性危机事件的心理准备不足，以至于在面对突发事件时容易产生心理紧张，甚至是群体性的恐慌，从而使个人和整个社会在认知和行为上的应对能力降低。因此，我们在平时应该有风险意识，增强知识和手段的储备。当遇到危机时，则应该注意保持健康的心态，客观、理性和积极地应对我们所面临的困境。其次，从更深的层次看，这次事件应该使我们更多地反思个人的各种行为。其中包括如何培养健康的生活方式和卫生习惯，如何处理人与动物、人与环境之间的关系等方面。人们对自身行为的主动约束不仅对个人健康有益，而且对整个社会的风险防范和可持续发展都具有至关重要的意义。最后，这次事件使我们更进一步看到危机时，靠社会集体的力量是最有效的方式。在过去技术力量低下的情况下是如此，在技术已高度发达的今天仍然是如此。因此，我们应该在平时就注重培养公共道德、集体意识、奉献和牺牲精神，以及政府与民众之间的相互信任，而这一切有依赖于我们有一个公开、整和充满信任的社会。抗击非典的斗争虽然取得了胜利，但我们还需要冷静，防控措施不能丝毫放松。我们坚信，一个民族在灾难中失去的，必将在未来社会的进步中得到补偿。祖国的明天更加灿烂、更加美好。