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电泳迁移率实验(EMSA)是一种研究DNA结合蛋白和其相关的DNA结合序列相互作用的技术,可用于定性和定量分析.这一技术最初用于研究DNA结合蛋白,目前已用于研究RNA结合蛋白和特定的RNA序列的相互作用.其基本原理是蛋白质可以与末端标记的核酸探针结合,电泳时这种复合物比无蛋白结合的探针在凝胶中泳动的速度慢,即表现为相对滞后(如下图所示).该方法可用于检测DNA结合蛋白、RNA结合蛋白,并可通过加入特异性的抗体(supershift)来检测特定的蛋白质,并可进行未知蛋白的鉴定.
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影响电泳迁移率的因素有:
1、电场强度:电场强度是指每lcm的电位降,亦即电势梯度。电场强度愈高,带电质点移动速度也愈快。
2、溶液的pH值:溶液的pH值决定了化合物解离的程度,也决定了质点所带的净电荷。对蛋白质氨基酸等两性电解质,其溶液幽H离等电点愈远,质点所带净电荷愈多,向相反电极的电泳速度也愈快。
3、溶液的离子强度:溶液的离子强度越高,质点的泳动速度愈慢,但区带分离度却较清晰;反之则越快,区带分离度亦较差。所以电极溶液的离子强度必须选择最佳数值。
溶液中带电粒子在电场 (E)中向着与它相异电荷的电极移动,它的移动速度(V)是电场(E)和粒子的有效迁移率(m)的乘积,即:V=mE
离子的有效迁移率是一个由许多因素(包括离子半径、溶剂化作用、介电常数、溶剂粘度、离子形状和电荷、pH、解离度和温度等)决定的物化系数。不同有效迁移率的粒子有不同的移动速度,因而可以彼此分离。
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扩展资料:
电泳中蛋白质分子量对数与迁移率呈线性关系,具体由凝胶的情况决定线性的范围也是一定的。
在确定的条件下,带电粒子在单位电场强度作用下,单位时间内移动的距离(即迁移率)为常数,是该带电粒子的物化特征性常数。
不同带电粒子因所带电荷不同,或虽所带电荷相同但荷质比不同,在同一电场中电泳,经一定时间后,由于移动距离不同而相互分离。分开的距离与外加电场的电压与电泳时间成正比。
在外加直流电源的作用下,胶体微粒在分散介质里向阴极或阳极作定向移动,这种现象叫做电泳。利用电泳现象使物质分离,胶体有电泳现象,证明胶体的微粒带有电荷。各种胶体微粒的本质不同,它们吸附的离子不同,所以带有不同的电荷。
参考资料来源:/电泳迁移率/2048331"target="_blank"title="百度百科——电泳迁移率">百度百科——电泳迁移率
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影响电泳迁移率的因素有:(1)电场强度:电场强度是指每lcm的电位降,亦即电势梯度。电场强度愈高,带电质点移动速度也愈快。(2)溶液的pH值:溶液的pH值决定了化合物解离的程度,也决定了质点所带的净电荷。对蛋白质氨基酸等两性电解质,其溶液幽H离等电点愈远,质点所带净电荷愈多,向相反电极的电泳速度也愈快。因此选择适宜的pH电极液,将有利于各种蛋白质的分离。为了使溶液pH值在电泳过程中保持恒定,必须使用缓冲溶液。(3)溶液的离子强度:溶液的离子强度越高,质点的泳动速度愈慢,但区带分离度却较清晰;反之则越快,区带分离度亦较差。所以电极溶液的离子强度必须选择最佳数值。(4)电渗:在电场作用下对于固体支持物的相对移动称为电渗。由于固体支持物多孔,常吸附溶液中的正离子或负离子,使溶液相对带负电或正电,在电场中,溶液就向正极或负极移动。为此,在选择支持物时应尽量避免选用具有高电渗作用的物质。其他如缓冲溶液的粘度、缓冲溶液与带电质点的相互作用以及电泳时的温度变化、电压不稳等因素也都能影响电泳速度。
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北京同仁医院移植中心主任.普外副主任。 中华医学会器官移植分会北京分会委员,中华医学会外科学分会肝脏外科学组青年委员等。1997年9月赴日本留学,在日本筑波大学
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