梁朝伟可爱
晶体渗透压——维持细胞内外水平衡胶体渗透压——维持血管内外水平衡血浆晶体渗透压是指血浆中的小分子物质(主要是氯化钠、其次是是碳酸氢钠、葡萄糖、尿素、氨基酸等)形成的渗透压力。晶体物质比较容易通过毛细血管壁,因此血液与组织液之间r的渗透压力基本相等。血浆晶体渗透压对维持细胞内外的水分子的正常交换和分布、电解质的平衡及保持血细胞的正常形态和功能具有十分重要的作用。血浆胶体渗透压的正常值约(25mmhg或)。主要由血浆蛋白构成,其中白蛋白含量多、分子量相对较小,是构成血浆胶体渗透压的主要成分。血浆胶体渗透压对于调节血管内外水分的交换,维持血容量具有重要的作用。
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形成:组织液和血液之间只隔一层上皮细胞构成的毛细血管壁,毛细血管壁具有较高的渗透性,当血液经过毛细血管时,除血细胞和大分子物质(如血浆蛋白)之外,水和其他小分子物质(如葡萄糖、无机盐、氧气),都可以透过毛细血管壁进入到组织间隙中形成组织液.渗透压主要是由电解质(如NaCl)产生的,由蛋白质来维持.血浆胶体渗透压主要来自白蛋白,血浆晶体渗透压主要来自Na+,K+.血浆渗透压的生理意义:血浆晶体渗透压能调节细胞内外水平衡,维持红细胞的正常形态和膜的完整;血浆胶体渗透压调节血管内外水的分布、维持血容量。
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生物的基因工程简述一种重组蛋白的性质;用途;重组菌的构建过程;生产方法与市场开发状况。选择(有意义的重组蛋白): 人血清白蛋白性质: (1). 白蛋白的分子结构已于1975年阐明,为含585个氨基酸残基的单链多肽,分子量为66458,分子中含17个二硫键,不含有糖的组分。在体液的环境中,白蛋白为负离子,每分子可以带有200个以上负电荷。它是血浆中很主要的载体,许多水溶性差的物质可以通过与白蛋白的结合而被运输。这些物质包括胆红素、长链脂肪酸(每分子可以结合4-6个分子)、胆汁酸盐、前列腺素、类固醇激素、金属离子(如Cu2+、Ni2+、Ca2+)药物(如阿司匹林、青霉素等)。用途:(1),它是从人的血液里分离出来的,作用是补充白蛋白,提高抵抗力,改善刀口愈合能力等,主要是用于低蛋白血症,如低蛋白的癌症病人 大手术后的病人,长期进食不好的病人。 (2),白蛋白是肝脏合成的,因此血清白蛋白浓度可以反映肝脏的功能,同时血清白蛋白水平的改变能导致一系列的病理性继发症,因此,测定血清白蛋白常用于病人状态的非特异监视。1、维持血液渗透压 白蛋白占全部血浆蛋白的50%以上。保持血液系统内的血浆胶体渗透压,调节组织与血管之间水的动力平衡,是维持渗透压的主要因素。正常人每100ml血液中白蛋白的含量为~克,但胶体渗透压中却有70~80%由白蛋白完成的,这是因为它分子小,分子量约万,(多数血浆蛋分子量在16~18万之间),有效渗透颗粒较多。1克白蛋白产生的渗透压相当于20毫升液体血浆或40毫升全血所得到的血液动力学效应是相等的。2、运输和解毒作用白蛋白能与许多物质结合产生广泛可逆构形的改变。白蛋白能结合阳离子,也能结合阴离子,所以白蛋白能输送许多性能不同的物质,如脂肪酸、激素、微量金属离子、酶、维生素和药物等。许多在水中微溶的物质,在血浆中或白蛋白溶液中则为易溶,事实上溶解物是与白蛋白结合而成的复合物。白蛋白这种结合功能有助于微溶的代谢物运输。除此之外,白蛋白并能结合有毒物质,运送至解毒器官,然后排出体外。3、抗休克作用白蛋白能增加血液的有效循环量,对于失血、创伤、手术或烧伤所致的各种休克,均有明显疗效。4、营养作用组织蛋白质和血浆蛋白质存在着动力平衡,可以互相转化,在氮代谢发生障碍时,白蛋白可作为机体内的氮源,为各种组织提供蛋白营养。白蛋白还能促进肝细胞的修复和再生。5、20~25%白蛋白液体是高渗液体,能调节由于胶体渗透压紊乱而引起的机能障碍,如浮肿、腹水。输入白蛋白液后能使浮肿消退和腹水减轻、利尿。对防止和减轻脑组织的水肿亦有显著的疗效。构建过程:生产方法:1 重组入血清白蛋白在细菌中的表达用于表达人血清白蛋白的细菌主要有大肠杆菌和枯草杆菌。早在8O年代初期,Richard M等人便从事这方面的研究,从活体或尸体的冻存肝脏中分离出人血清白蛋白RMA,重组的质粒包含有成熟人血清白蛋白编码区的基因,由大肠杆菌的trP启动于——操纵子来控制质粒合成人血清白蛋白,DNA序列表达的蛋白是含前面带有24个氨基酸前体肽的585个氨基酸的蛋白质。Martine Latta 等人于 80年代后期也用大肠杆菌表达人血清白蛋白,从肝脏分离人血清白蛋白RNA加上PolyA来组建cDNA文库,分离获得的cDNA包含有成熟人血清白蛋白的编码序列和表达质粒PXL276,用PL启动子代替trP启动子,同时在一些位点插入一些片段,构建了大肠杆菌中比较有效的细菌表达系统,菌株以 LB培养基培养,用声裂法破碎细胞,再进行提取、重新天然化及提纯,获得了甲硫氨一HSA(MET-HSA),MET-HSA重新天然化及提纯后,与天然的人血清白蛋白非常相似。用大肠杆菌表达人重组血清白蛋白,虽然取得一些结果,有报道称,人血清白蛋白在大肠杆菌中表达量为细胞蛋白的7%,但用此法未能得到具生物活性的蛋白。枯草杆菌作为可表达异种蛋白的细菌中的一类,也被用来表达重组人血清白蛋白,将表达人血清白蛋白的结构基因与信号序列的编码区域融合在一起,可以在枯草杆菌中合成人血清白蛋白,但是,另一项研究表明,当人血清白蛋白表达水平低时,信号肽可以有效地被除去,一旦表达水平高时,信号肽的除去率便低,因此用此法无法进行人血清白蛋白高效表达。2 重组入血清白蛋白在真菌中的表达现在常用来表达人血清白蛋白的真菌主要是酵母,常用的有啤酒酵母(Saccharomyces Cerevisiae)、乳酸克鲁维酵母(Kluyromyces Lactis)和毕赤酵母(Pichia Pastoris)。2.1 啤酒酵母用啤酒酵母表达重组人血清白蛋白是近期研究较多的课题之一。 等人证明啤酒酵母可以表达人血清白蛋白并可将其分泌到培养介质中,采用5种不同的引导序列,即质粒pAYE176、pAYE239、pAYE227、pAYE264和pAYE283,经过DNA合成,克隆反应,转化,DNA纯化及酵母培养,用聚丙烯酸胺凝胶电泳及。Western杂交来进行蛋白质的检测,其结果为;pAYE283和pAYE239引导的系统人血清白蛋白的表达量最高,为55mg/L。实验结果表明,引导序列的选择及与结构蛋白的关系是获得成功的关键。Miklos Kalman等用啤酒酵母表达人血清白蛋白,摇瓶实验表明其表达量可达1Omg/L。Quirk AV等人将啤酒酵母产生的重组人血清白蛋白与血浆中提取的人血清白蛋白通过一系列的分析技术进行比较,结果两种蛋白质的结构一致。此外,Kang HA等人还探讨了啤酒酵母表达的重组人血清白蛋白的蛋白水解的稳定性,其结果表明,啤酒酵母分泌的人血清白蛋白对PH依赖的蛋白水解介质非常敏感,介质成分的含量对其有影响。2.2 乳酸克鲁维酵母乳酸克鲁维酵母是另一种表达重组人血清白蛋白量较多的酵母。R. Fleer等人于90年代初期研究了乳酸克鲁维酵母高浓度分泌重组人血清白蛋白的稳定性多拷贝载体,使用的载体为pKD1,用克鲁维酵母/pKD1表达系统,重组人血清白蛋白的分泌水平在摇瓶培养时为40Omg/L。Saliola M等人于1999年用KIADH4启动子,用乙醇诱导,使乳酸克鲁维酵母表达重组人血清白蛋白。KIADH4是乳酸克鲁维酵母中编码线粒体乙醇脱氢酶的基因,乙醇可激活乙醇脱氧酶的活性。KIADH4启动子可用于乳酸克鲁维酵母中异常蛋白的表达。其研究结果表明,在KIADH4启动子的控制下,乙醇激活乳酸克鲁维酵母中的细菌卜葡萄糖音酸和人血清白蛋白基因,以乙醇为碳源,人血清白蛋白的产量提高,介于/L~1g/L之间。2.3 毕赤酵母毕赤酵母是近10年发展起来的真核表达系统,是现今比较令人满意的表达系统,经高密度培养,可获得高表达的重组人血清白蛋白,而且其它杂蛋白很少,有利于纯化。毕赤酵母属于甲醇酵母,可以甲醇作为单一碳源和能源物质。美国和日本的两大公司均是利用这一系统来进行重组人血清白蛋白的生产,其表达水平分别为5g/L和7g/L。邱荣德等对构建的毕赤酵母工程菌进行表达条件的优化,将摇瓶中表达重组人血清白蛋白的量提高到150mg/L。由于毕赤酵母是现今表达重组人血清白蛋白水平最高的系统,许多实验室从不同的角度对毕赤酵母表达的重组人血清白蛋白进行了研究。Ohtani W等人于1997年研究了毕赤酵母表达的重组人血清白蛋白的结构,结果表明,rHS完全氨基酸成分,末端序列和完全的氨基酸序列与cDNA推导的初始结构一致。重组人血清白蛋白的CD光谱在形状和强度上与血浆人血清白蛋白一致。人血清白蛋白的二硫化键的结构是非常重要的,它包含35个半胱氨酸残基, Ikeyaya等人应用气相蛋白质序列的方法来检测纯化的重组人血清白蛋白多-二硫键的性质。其结果表明:重组人血清白蛋白的流基成分与血浆人血清白蛋白是一样的。结构分析结果提示,提纯后的重组人血清白蛋白与血浆人血清白蛋白有相同的结构,而且,与血浆人血清白蛋白相比没有新抗原,临床研究也证明了重组人血清白蛋白是有效而且安全的。用真菌表达人血清白蛋白的方法比较成熟,表达量也比较高,但是,在临床上对人血清白蛋白的纯度要求比较高,所以在后期纯化上仍有许多问题需要进一步解决;而且,一旦进入产业化,人血清白蛋白的表达量势必要降低许多,这些都是需要考虑的问题。3 重组人血清白蛋白在植物中的表达用转基因植物生产重组疫苗,经过许多研究者的研究已成为可能。Sijimons等人于199O年将人血清白蛋白基因导入土豆和烟草中,以改装的CaMV355为启动子,生成了转基因土豆和转基因烟草。结果表明,两种转基因植物的叶子中均含有人血清白蛋白,这表明,用转基因植物生产重组人血清白蛋白已有可能。用植物大量生产外源蛋白比用动物细胞生产便宜,而且简单;但是,国内外研究者对转人血清白蛋白基因植物的研究很少,说明转基因植物生产入血清白蛋白仍存在许多问题。4 重组入血清白蛋白在动物中的表达转基因动物的乳腺生物反应器,由于其细胞能够将外源基因进行表达,提纯蛋白比较简单,而且可以提高产量,使药物蛋白的生产成本降低,许多研究者对其越来越有兴趣。用转基因动物生产人血清白蛋白,已有许多研究者对之进行研究。目前,做转基因小鼠的研究较多,其中最高表达量达35mg/ml。Shani M等人以绵羊 BLG为启动子,进行转重组人血清白蛋白基因小鼠的研究,结果表明,载体中包含有人血清白蛋白基因和内含子1、内含子2的转基因小鼠,在其奶中人血清白蛋白的表达水平为1~35mg/ml,此研究证实了转基因动物可以在奶中高效表达人血清白蛋白,在此过程中,内含子起了非常重要的作用。 HurVitz DR等人研究的转基因小鼠人血清白蛋白的表达量为10mg/ml;Barash Ⅰ等人研究的转基因小鼠人血清白蛋白的表达量为/ml。此外,Pieper、Perraud、Baruch、Ⅰlan以及苟德明等均进行了转入血清白蛋白小鼠的研究,也获得了阳性表达的小鼠。1999年3月,上海医学遗传研究所在国际上首次成功地培育了一头转基因试管牛,其身上携带有人血清白蛋白基因,这一成果为通过转基因动物途径大量生产人类所需的药物蛋白迈出了重要的一步。此外,美国 TraXenoGen公司也研究、开发了用转基因的鸡蛋生产入血清白蛋白。用转基因动物生产人血清白蛋白,一旦形成产业化,其前景是不可估量的,一是可以提高人血清白蛋白的产量,二是可以使纯化过程简单,从而极大地降低成本。但用此法仍存在着生产出的人血清白蛋白会携带某些动物病毒的潜在性,且此法正处于研究阶段,要进行产业化生产仍需要较长时间。市场的开发状况: (1)。目前国内,注射血清都是有一定危险性的,因为里面可能存在其他为杀死的病菌, 乙肝. 艾滋都有可能,但是几率很低的。(2)。现在中国这药奇缺!!很不好买,药店一定没有,只有大的生物制剂制药厂才有,现在好像只有医院能进,很多医院也进不到了,现在只有用血浆代替!(3). 由于各种血液传染病对人类造成的危害,血液的来源会越来越紧缺,传统的血浆提取方法将会受到制约,重组人血清白蛋白的方法有很多,各种方法均有其优、缺点,仍有许多需要解决的问题和困难。目前技术上比较成熟并已进入产业化的方法是毕赤酵母表达人血清白蛋白,而研究较多又具有发展前景的是转基因生物反应器。重组人血清白蛋白的生产将是具有前途的产业。
天可莲见
人体血液循环系统应该根据新发现的情况和各方面的需要,将原称为体循环和肺循环两个系统,改称为上体、下体、左肺、右肺四个系统。人体血液循环新探打开人体血液循环图,那密如蛛网红蓝相间的血管布满了全身,其中最惹眼的是上、下、左、右那两根粗粗的动静脉血管,对此该如何解释呢?传统医学是这样讲的——人体血液循环分为体循环和肺循环两个系统。这种划分正确不正确?有没有改变的必要?这是本文探索的主要内容。下面从三个方面来加以阐释:一、传统医学关于人体血液循环理论的由来血液循环理论是英国哈维根据大量的实验、观察和逻辑推理于1628年提出的。然而限于当时的条件,他并不完全了解血液是如何由动脉流向静脉的。1661年意大利马尔庇基在显微镜下发现了动、静脉之间的毛细血管,从而完全证明了哈维的正确推断。动物在进化过程中,血液循环的形式是多样的。循环系统的组成有开放式和封闭式;循环的途径有单循环和双循环。人类血液循环是封闭式的,传统医学认为:是由体循环和肺循环两条途径构成的双循环。解释如下:血液由左心室射出经主动肪及其各级分支流到全身的毛细血管,在此与组织液进行物质交换,供给组织细胞氧和营养物质,运走二氧化碳和代谢产物,动脉血变为静脉血;再经各级表肪汇合成上、下腔静脉流回右心房,这一循环为体循环。血液由右心室射出经肺动脉流到肺毛细血管,在此与肺泡气进行气体交换,吸收氧并排出二氧化碳,静脉血变为动脉血;然后经肺静脉流回左心房,这一循环为肺循环。血液循环的主要功能是完成体内的物质运输。血液循环一旦停止,机体各器官组织将因失去正常的物质转运而发生新陈代谢的障碍。同时体内一些重要器官的结构和功能将受到损害,尤其是对缺氧敏感的大脑皮层,只要大脑中血液循环停止3~10分钟,人就丧失意识,血液循环停止4~5分钟,半数以上的人发生永久性的脑损害,停止10分钟,即使不是全部智力毁掉,也会毁掉绝大部分。二、传统血液循环理论辨析首先,可以肯定:把人体血液循环分为体循环和肺循环有它一定的道理。如果没有它的道理,也不会存在和使用几百年。就是今后,有的人仍然会坚持这种分类法。我认为:以前之所以把人体血液循环分为体循环和肺循环两个系统,就是觉得不管是体循环还是肺循环,血液毕竟是从同一个地方流出去,然后流回到另外同一个地方。体循环是由左心室流出去然后回到右心房;肺循环是由右心室流出去然后回到左心房。其次,也可以肯定:这种划分有它不足之处。就是忽略了血液流出时尽管是同一个地方,但毕竟是从多个通道流出去的;流回来也是一样,也是从不同方向流回来的;尽管最终会汇合在一起,但在汇合前相互间是没有关系的。从心脏解剖图来看,人体血液循环清清楚楚分成了四个方向,有六个出口,六个进口。情况是这样的:体循环由左心室射出,1个口向下,3个口向上,经主动肪及其各级分支流到全身的毛细血管,在此与组织液进行物质交换,供给组织细胞氧和营养物质,运走二氧化碳和代谢产物,动脉血变为静脉血;再经各级表肪汇合到上、下2个腔的静脉口流回右心房。肺循环由右心室射出,1个口向左,1个口向右,经肺动脉流到肺毛细血管,在此与肺泡进行气体交换,吸收氧并排出二氧化碳,静脉血变为动脉血;然后经左、右肺各2个腔的静脉口流回左心房。从以上这些过程看,血液从始点流出后,再流回到终点前,相互是没有关系的。既然没有关系,把人体血液循环看成上体、下体、左肺、右肺四个系统也是可以的。三、建立新的血液循环理论非常有必要如果从医学上来说,把人体血液循环看成两个系统或者四个系统都不是什么大问题,因为不牵涉到血液的变化问题,只是就循环系统来说,各自的起始点不同而已。但是,对于预防和治疗与人体姿势有关的疾病来说,就非常重要了。如果全面来考虑,我认为将人体血液循环由原来定义为两个系统,重新定义为四个系统为好。其理由是:1、从人体血液运行的实际情况看,定义为四个系统更合理。人体血液无论向何处循环流动,均受同一个心脏的控制。通过人体血流检测分析得知:由于受地心吸引力的影响,心脏上、下、左、右的血流速度和流量是不一样的。而人又时常在变换姿势,把上与下和左与右根本就不同的四个东西硬说成相同的两个,这有些不恰当。既然是讲系统,就应该主要看它们成不成系统,血液又是怎么运行的。现在看来,这四个方向的血液循环是成系统的,而且它们的血液流速与流量又不一样,所以看成一个独立的系统才更为合理。而传统血液循环理论的确立之所以没有考虑以上这些因素,就是当时不知道地心有吸引力,而且更不知道地心吸引力对人类直立生活直立供血的影响。传统人体血液循环理论的建立是在1628年至1661年间,而牛顿发现地心有吸引力是在这之后。现在,我们已经清楚地知道了地心吸引力对人类直立生活直立供血导致的这些差异,完全有理由按实际情况对人体血液循系统进行重新划分。2、 可以预防不少种类的疾病。建立新的血液循环理论后,人们只要知道了“血液是朝上、下、左、右四个方向运行的,以及血液循环受地心吸引力影响”这两个常识,就会自觉不自觉的从小注意身体姿势的摆放,由此就可以预防不少疾病。比如人们站坐立太久之后,就会主动的躺一躺倒一倒,进行人体反向调整。晚上睡觉时,就不会固定某种姿势,而会采用仰、俯、左、右四种姿势睡觉。这样一来,人类因为姿势不正确和血液循环不畅而产生的疾病就会大为减少,人的寿命也会大大地延长。3、 可以治疗不少陈旧性疾病。运用新的血液循环理论,不用打针服药就可以治疗许多因为姿势不正确和血液循环不畅引起的疾病。比如:因为身体某个部位血流速度太慢而产生不适,就抬高这些部位,有意识地加快这些部位的血液循环;因为身体某个部位血流量或者说营养不够而产生不适,就放低这些部位,人为地多给这些部位供应血液或者说营养。就是这么一个简单的方法,不但会减少不少人的痛苦,而且会给国家和社会节约无法计算的资源。所以,把人体血液循环系统划分成上体、下体、左肺、右肺四个系统,不但有它的合理性,而且还有它的现实紧迫性。
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