乳酸菌饮料中乳酸菌的检测论文

21 乳酸菌的检测依据：GB/T 4789.35《食品卫生微生物学检验乳酸菌饮料中乳酸菌检验》。乳酸菌计数时：应把嗜热链球菌和双岐杆菌计算在内。检验益生菌时：检测之前初步判断其所含乳酸菌属（一般样品的说明中会注明添加的益生菌种类），根据乳酸菌属确定培养方法和所用培养基及接种条件，具体依据GB/T4789.35中规定，如只检双歧杆菌必须用涂布法且厌氧培养，如样品不含双歧杆菌，且作乳酸菌计数时可采用倾注法。培养基的选择：13在国标GB/T4789.35-2008中明确说明：根据样品中含有乳酸菌属的不同选择不同的培养基：(1)只含有双歧杆菌属，采用MRS琼脂培养基专性厌氧培养；(2)只含有乳杆菌属，采用MRS琼脂培养基兼性厌氧培养；(3)只含有嗜热链球菌属，采用MC琼脂培养基兼性厌氧培养；(4)同时含有双歧杆菌属和乳杆菌属，采用MRS琼脂培养基专性厌氧培养和兼性厌氧培养，总数为两种培养基上菌落总数的加和；(5)同时含有双歧杆菌属、乳杆菌属、嗜热链球菌属，采用MRS琼脂培养基专性厌氧培养和兼性厌氧培养及MC琼脂培养基兼性厌氧培养，总数为三种培养基上菌落总数的加和。双歧杆菌的计数：只要样品配料中加入双歧杆菌菌种，不论添加多少双歧杆菌菌种，不论有无独立的双歧杆菌的卫生指标标准，进行乳酸菌计数时必须进行双歧杆菌的检测。菌落的计数及结果的报告：(1)分别选取乳酸菌菌落数在30-300之间的平板进行分别计数，具体计数方法及菌落的报告依据GB/T4789.2中规定进行；(2)最终的结果取其和，报告方式依据GB/T4789.2中规定进行。

1、准备无菌水、无菌空白平板、无菌移液管 2、培养乳酸菌培养,灭菌,冷却至50度左右 3、无菌室灭菌30分钟后,在无菌室内,把饮料用无菌水稀释成适当的倍数（如10的负5、6、7次方） 4、分别吸取0.1ml或1ml三个不同稀释度的菌悬液,放于空白平板中,平板中倒入50度左右的培养基15-20ml,平板平放于实验桌上,轻轻摇动,使菌悬液与培养基充分混合 5、平板中培养基凝固后,做好标记 6、倒置于培养箱中,30度培养24-72小时左右 7、观察菌落生长状态,并进行计算

看到的不知是不是想要的还有另个乳酸菌饮料中乳酸菌的微生物学检验 1 主题内容与适用范围 本标准规定了乳酸菌饮料中乳酸菌检验的技术要求。 本标准适用于以鲜乳、乳粉或辅以大豆等为原料，经乳酸菌发酵加工制成的具有相应风味的活性乳酸菌饮料。 2 引用标准 GB 4789.28 食品卫生微生物学检验 染色法、培养基和试剂 3 术语 乳酸菌：一群能分解葡萄糖或乳糖产生乳酸，需氧和兼性厌氧，多数无动力，过氧化氢酶阴性，革兰氏阳性的无芽胞杆菌和球菌。 乳酸菌菌落总数：检样在一定条件下培养后，所得1mL检样中所含乳酸菌菌落的总数。 4 设备和材料 4.1 温箱：36±1℃。 4.2 冰箱：0～4℃。 4.3 恒温水浴：46±1℃。 4.4 电炉：可调式。 4.5 吸管：容量为1，10和25mL。 4.6 广口瓶或三角瓶：容量为500mL。 4.7 平皿：直径为9cm。 4.8 试管：18×180mm。 4.9 显微镜。 5 培养基和试剂 5.1 改良TJA培养基(改良番茄汁琼脂培养基)。 5.2 改良MC培养基(Modified Chalmers培养基)。 5.3 0.1%美兰牛乳培养基。 5.4 6.5%氯化钠肉汤。 5.5 pH9.6葡萄糖肉汤。 5.6 40%胆汁肉汤。 5.7 淀粉水解培养基。 5.8 精氨酸水解培养基。 5.9 乳酸杆菌糖发酵管。 5.10 七叶苷培养基。 5.11 革兰氏染色液：按GB 4789.28规定执行。 5.12 3%过氧化氢溶液：按GB 4789.28规定执行。 5.13 蛋白胨水、靛基质试剂：按GB 4789.28规定执行。 5.14 明胶培养基：按GB 4789.28规定执行。 5.15 硝酸盐培养基、硝酸盐试剂：按GB 4789.28规定执行。 5.16 生理盐水：定量分装于三角瓶和试剂管内灭菌。 6 乳酸菌菌落总数的测定 6.1 检验程序 乳酸菌菌落总数检验程序如下： （略） 6.2 操作步骤 6.2.1 以无菌操作将经过充分摇匀的检样25mL(或25g)放入含有225mL灭菌生理盐水的灭菌广口瓶内作成1∶10的均匀稀释液。 6.2.2 用1mL灭菌吸管吸取1∶10稀释液1mL，沿管壁徐徐注入含有9mL灭菌生理盐水的试管内(注意吸管尖端不要触及管内稀释液)。 6.2.3 另取1mL灭菌吸管，按上述操作顺序，作10倍递增稀释液，如此每递增一次，即换用1支1mL灭菌吸管。 6.2.4 选择2～3个以上适宜稀释度，分别在作10倍递增稀释的同时，即以吸取该稀释度的吸管移1mL稀释液于灭菌平皿内，每个稀释度作两个平皿。 6.2.5 稀释液移入平皿后，应及时将冷至50℃的乳酸菌计数培养基(改良TJA或改良MC)注入平皿约15mL，并转动平皿使混合均匀。同时将乳酸菌计数培养基倾入加有1mL稀释液检样用的灭菌生理盐水的灭菌平皿内作空白对照，以上整个操作自培养物加入培养皿开始至接种结束须在20min内完成。 6.2.6 待琼脂凝固后，翻转平板，置36±1℃温箱内培养72±3h取出，观察乳酸菌菌落特征(见表1)，选取菌落数在30～300之间的平板进行计数。计算后，随机挑取5个菌落数进行革兰氏染色，显微镜检查并做过氧化氢酶试验。革兰氏阳性，过氧化氢酶阴性，无芽胞的球菌或杆菌可定为乳酸菌。根据证实为乳酸菌菌落计算出该皿内的乳酸菌数，然后乘其稀释倍数即得每毫升样品中乳酸菌数。例如，检样10－4的稀释液在改良TJA琼脂平板上，生成的可疑菌落为35个，取5个鉴定，证实为乳酸菌的是4个，则1mL检样中乳酸菌数为： 6.3 乳酸菌在改良TJA和改良MC培养基上菌落生长形态特征见表1。 表1 乳酸菌在不同培养基上菌落特征 （表略） 7 乳酸菌的鉴定 对上述分离到的乳酸菌需进行菌种鉴定时，则作以下试验。 7.1 菌种制备：自平板上挑取菌落，接种于改良TJA或改良MC琼脂斜面，于36±1℃，24～48h培养，刮取菌苔，分别进行下列试验。 7.2 乳酸杆菌鉴定试验：极少见还原硝酸盐，不液化明胶，不产生靛基质和硫化氢。 7.3 常见乳杆菌属内种的碳水化合物反应，见表2。 7.4 产乳酸的链球菌的鉴别试验，见表3。 表2 常见乳杆菌属内种的碳水化合物反应 （表略） 表3 乳酸的链球菌的鉴别表 （表略）