生理盐水对微生物的影响研究论文

环境因素对微生物的影响实验报告如下：

一、 实验目的。

1. 熟悉常用微生物培养基的配置方法。

2. 学习并掌握各种无菌操作技术，并用此技术进行微生物稀释分离、划线分离接种。

3. 用平板划线法和稀释法分离微生物。

4. 认识微生物存在的普遍性，体会无菌操作的重要性。

二、 实验原理。

土壤中有数量巨大、种类丰富的微生物，可以从中分离、纯化得到许多有价值的菌株。从混杂的微生物群体中获得只含有某一种或某一株微生物的过程称为微生物的分离与纯化。常用的是平板分离法。

平板菌落计数法是将待测样品经适当稀释，使其中的微生物充分分散成单个细胞，取一定量的稀释样液接种到平板上，经过培养，由每个单细胞生长繁殖而形成肉眼可见的菌落，即一个单菌落应代表原样品中的一个单细胞。统计菌落数，根据其稀释倍数和取样接种量即可换算出样品含菌数。

三、 实验器材。

土样10g，牛肉膏蛋白胨培养平板20个，未知菌种平板，当天降雪。

平皿，涂棒，接种环，无菌200ul, 1000ul吸头，记号笔，酒精灯，取液器:1000ul 、200ul各一支，培养箱。

0.9% 无菌生理盐水，250ml三角瓶中装99ml生理盐水,每瓶加约20粒玻璃珠，250ml三角瓶中99ml生理盐水,作100倍稀释用。

四、 实验步骤。

1. 配置培养基：取牛肉膏5g，蛋白胨10g，NaCl5g，蒸馏水1000ml配置培养基，调pH至7.2，灭菌。于讲课前倒板20块。

2. 采集野外样品：选择肥沃土壤,去表层土,挖5~20cm深度的土壤数10g,装入烧杯,带回实验室;取校河水装入烧杯，带回实验室；取新积雪中间层转入烧瓶，带回实验室。

3. 制备土壤稀释液：称取土样1.0g，放入盛99ml无菌水并带有玻璃珠的三角瓶中，用手振荡5min使土壤均匀分散成为土壤悬液（10-2）。用200ul的无菌吸头从中吸取0.1ml土壤悬液，注入事先分装有0.9ml无菌水的试管中，吹吸3次，摇匀（10-3）。类推制得10-4、10-5的土壤悬液。

4. 涂板：

1） 土壤稀释液（9块）：用无菌吸头，分别吸取10-3、10-4、10-5浓度土壤稀释液100ul，较均匀地放入已写好稀释度的牛肉蛋白胨培养基平板上，用无菌玻璃涂棒涂匀。每个浓度做3个平板。

2） 单菌落划线（4块）：用接种环挑取未知平班上的菌落，做单菌落划线分离，每人2板。

3） 手指（1块）：分别用未洗过的手指头, 用自来水打湿的手指头，用自来水洗过的手指头，用肥皂洗过的手指头和用酒精棉球擦过的手指头(不用毛巾擦)在同一平板的不同分区涂抹（用力一致）。

4） 硬币（1块）：取3枚1角硬币，按在平板的3个分区。

5） 头发（1块）：放置一根头发，用无菌图布棒压紧在培养基上。

6） 牙垢（1块）：用无菌牙签取一点牙垢在培养基上划线。

7） 空气（2块）：打开培养皿置实验台上（空气中）10min，按无菌操作要求在酒。精灯火焰边打开皿盖1min。

8） 积雪（1块）：用移液器吸取100ul雪水，较均匀地放入已写好稀释度的牛肉蛋。白胨培养基平板上，用无菌玻璃涂棒涂匀。

5. 培养：用报纸包好倒置35℃培养箱里培养24小时。

6. 观察结果：对土壤稀释液平板进行计数，单菌落划线平板分离单菌落，其他平板观。察微生物种类、数量。所有平板都要照相。